免疫荧光

服务简介

免疫荧光（Immunofluorescence, IF）是一种利用荧光染料标记的抗体，对组织切片或细胞样本中特定抗原进行定位、定性和半定量检测的经典技术。该技术具有高特异性、高灵敏度、多色标记及原位观察等优势，可清晰展示目标蛋白在细胞内的亚定位、细胞间的分布差异及组织中的空间表达模式。

我们提供高质量、标准化的免疫荧光染色服务，支持石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片、细胞涂片等多种样本类型，可完成单标、双标及三标（四色）荧光染色，满足您从细胞水平到组织水平的多样化研究需求。

实验原理

免疫荧光基于抗原-抗体特异性结合原理

间接法（最常用）：未标记的一抗与抗原特异性结合后，荧光染料标记的二抗再与一抗结合，通过信号级联放大实现高灵敏度检测。该方法灵活性强，可用一种二抗检测多种一抗。

直接法：荧光染料直接标记一抗，一抗与抗原结合后即可在荧光显微镜下观察。该方法操作快速、非特异性背景低，但灵敏度相对较低。

实验流程（常规采用间接免疫荧光法）

①样本制备：石蜡切片脱蜡至水 / 冰冻切片固定 / 细胞爬片固定。

②抗原修复（石蜡切片）：热修复（枸橼酸盐或EDTA）暴露抗原表位。

③通透（胞内抗原）：Triton X-100处理，使抗体进入细胞内。

④封闭：BSA或血清封闭非特异性结合位点。

⑤一抗孵育：特异性一抗4℃过夜或室温1-2小时。

⑥二抗孵育：荧光标记二抗（如Alexa Fluor系列）室温避光30-60分钟。

⑦细胞核复染：DAPI或Hoechst染色5-10分钟。

⑧封片与成像：抗荧光淬灭封片剂封片，荧光显微镜或多光谱成像系统采集图像。

服务内容与周期

应用领域

1、蛋白亚细胞定位：确定目标蛋白在细胞核、细胞质、细胞膜或特定细胞器（线粒体、内质网、高尔基体）的分布。

2、细胞表型鉴定：鉴定原代细胞、干细胞、转染细胞中的标志物表达。

3、组织微环境研究：观察免疫细胞浸润、血管生成、纤维化区域中的蛋白表达。

4、共定位分析：研究两种或多种蛋白在细胞内的相互作用或共定位关系。

5、信号通路动态变化：检测药物处理或基因干预后，磷酸化蛋白、转录因子的核转位等变化。

6、病理诊断辅助：自身抗体检测（如抗核抗体ANA）、肿瘤标志物定位等。

7、神经科学：神经元、胶质细胞、突触蛋白的精细结构观察。

免疫荧光（IF）与TSA多重荧光染色对比

实验结果示例

参考文献

1、TRAP1 drives smooth muscle cell senescence and promotes atherosclerosis via HDAC3-primed histone H4 lysine 12 lactylation

2、Lesional activation of Tc 17 cells in Behçet disease and psoriasis supports HLA class I-mediated autoimmune responses

3、Discovery of a glucocorticoid receptor (GR) activity signature correlates with immune cell infiltration in adrenocortical carcinoma

常见问题

Q1：免疫荧光和免疫组化（IHC）有什么区别？

IF使用荧光染料标记，灵敏度高，适合共定位和定量分析，但荧光易淬灭；IHC使用酶显色（DAB），可长期保存，适合形态学观察和半定量评分。两者可互补使用。

Q2：石蜡切片和冰冻切片做IF哪个更好？

石蜡切片形态保存好，适合大多数抗原，但需要抗原修复；冰冻切片无需修复，抗原保存好，适合易受损表位，但形态稍差。我们可根据抗体说明书推荐最优方案。

Q3：如何避免荧光串色（cross-talk）？

选择光谱重叠小的荧光染料（如DAPI、FITC、Cy3、Cy5组合）；使用窄带滤光片；单染对照用于调节补偿；多色成像时依次采集各通道。

Q4：客户需要提供一抗吗？

客户可提供已验证的一抗，也可委托我司代购。我们提供免费抗体验证预实验，确保最佳稀释比。

Q6：能否同时检测3个以上靶标？

传统IF受限于一抗种属和荧光染料光谱重叠，最多稳定实现3色（3个靶标+ DAPI）。如需检测4个及以上靶标，强烈推荐使用TSA多重荧光技术。