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实验原理

GST pull-down是一种体外验证蛋白质-蛋白质直接相互作用的实验技术。
基本原理是：将目标蛋白（诱饵蛋白）与谷胱甘肽-S-转移酶（GST）融合表达，通过谷胱甘肽琼脂糖珠将GST融合蛋白固定于固相载体上。然后将含有待测蛋白（猎物蛋白）的细胞裂解液与固定化的GST融合蛋白共孵育。如果两种蛋白存在直接相互作用，猎物蛋白会被捕获到琼脂糖珠上。经过洗涤去除未结合的蛋白后，通过Western Blot检测猎物蛋白是否存在，从而验证两种蛋白之间的直接相互作用。
该技术可用于验证已知蛋白对的相互作用，也可用于筛选与目标蛋白相互作用的未知蛋白。

服务流程

GST-诱饵蛋白原核表达载体构建/His-猎物蛋白原核表达载体构建—原核表达—蛋白纯化—Pull-down捕获猎物蛋白—SDS-PAGE电泳—Western blot或LC-MS/MS

实验流程

服务内容

服务内容及说明

适用场景

1、用于验证两个已知蛋白的相互作用
2、筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白

实验周期

GST pull-down * 结果示例

相关参考文献

1、Lactylation-Driven HECTD2 Limits the Response of Hepatocellular Carcinoma to Lenvatinib
2、SNORA49 negatively regulates self-renewal of liver cancer stem cells and hepatocarcinogenesis via suppressing SOX9 transcription
3、DSS1 inhibits autophagy to activate epithelial-mesenchymal transition in a pro-metastatic niche of renal cell carcinoma