RIPA裂解液（ 中 ）

【产品简介】 RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样 品可以用于常规的PAGE 、Western、免疫沉淀、免疫共沉淀和ELISA等。 

【保存条件】 -20℃保存，有效期为1年。 

【使用说明】 

1. 本产品是一款传统的细胞组织裂解液，该缓冲液与许多应用相容包括SDS-PAGE,western blot，免疫沉淀和ELISA等。 2. 本产品的主要成分1%NP-40 ,0.5% Sodium deoxycholate,0. 1% SDS以及含有sodium fluoride,sodium orthovanadat等抑制剂，可以有效裂解蛋白样品，所有步骤都需要在冰上进 行。 3. 裂解得到的蛋白样品，含有较高浓度的去垢剂，不建议用 Bradford 法测定蛋白浓度，可 以选用 BCA 蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。 

对于培养细胞样品： 溶液在使用前数分钟内加入相应量的PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM或者根据实验需要加入 适当的蛋白磷酸酶抑制剂混合物。 

贴壁细胞：计数后去除培养液，细胞刮收集细胞，200g离心5min，用PBS、生理盐水清洗多次。 按照2×10 6细胞约6孔板每孔加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液 和细胞充分接触。置于冰上，于摇床上裂解30分钟。 

悬浮细胞：离心收集细胞，轻轻vortex或者弹击管底以把细胞尽量分散开。按照5×10 5细胞数每 孔加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液充分裂解细胞。裂解后应没有明显的细胞沉淀。 可根据需要进行超声裂解，充分裂解后，10000-14000g 4℃离心10分钟，取上清，即为蛋白提取物，可进行后续操作。 

对于组织样品： 

a. 把组织放于预冷的PBS或生理盐水中漂洗数次，将组织剪切成细小的组织碎片。对于心脏， 肾脏等含血量丰富的应多次洗涤，确保无血液干扰。 

b. 取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为lmM，或者根据 实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。

c. 称量组织，按照每20毫克组织加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液，即组织净重（mg）： 裂解液（ul）= 1:10的比例，然后立即进行匀浆。用玻璃匀浆器快速匀浆，直至肉眼观察无明 显组织块，然后再冰上裂解30分钟左右，直至充分裂解。也可以把组织样品冷冻后液氮研磨， 研磨充分后加入裂解液进行裂解。 

d. 充分裂解后，10000-14000g 4℃ 离心5-10分钟，取上清，即可进行后续蛋白分析等操作 

【注意事项】 

1. 为了您的身体安全及健康，请穿实验服及佩戴一次性手套操作。 

2. 本产品仅限于科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。