Anti-DYKDDDDK (Flag) MagBeads

【产品简介】

本司生产的抗DYKDDDDK(Flag)磁珠，是由高品质的DYKDDDDK兔单克隆抗体与纳米级羧基磁珠共价偶联而成，可特异性地与动植物或微生物裂解液、血清、腹水等中含有DYKDDDDK标签的融合蛋白结合，并可以借助磁力架等磁分离设备非常便捷地应用于带有DYKDDDDK标签的融合蛋白或其蛋白复合物的免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)、免疫共沉淀(Co-IP)或纯化等实验。

【货 号】 P1801

【规 格】 0.5ml/1ml/5ml

【产品信息】 

【保存条件】 4ºC保存，有效期一年。

【操作步骤】 

一、样品的制备

1.推荐使用商业化的IP裂解液，用于制备细胞或组织的裂解液。如果使用自行配制的裂解液，需要确保裂解液的pH为6-8。

2.新鲜制备好的样品，建议尽量当天完成免疫沉淀或免疫共沉淀、标签蛋白的纯化等操作；若样品不能当天使用，也可以适当分装后-80℃冻存，但可能影响效果。

二、抗DYKDDDDK磁珠的准备

由于抗DYKDDDDK磁珠储存在特殊保护液中，所以需要在加入样品前适当洗涤。

1.轻轻重悬抗DYKDDDDK磁珠，按照每500μL样品加入10-20μL磁珠悬浊液，取适量抗DYKDDDDK磁珠至一干净离心管中，加入1×PBS至最终体积为约0.5 mL。

2.充分重悬抗DYKDDDDK磁珠，然后置于磁力架上分离10秒，去除上清。重复上述步骤两次。

3.按照初始体积的量，用1×PBS重悬抗DYKDDDDK磁珠。

三、免疫沉淀

1.加入磁珠并孵育。按照每500μL蛋白样品加入10-20μL磁珠悬浊液的比例加入抗DYKDDDDK磁珠，置于旋转混合仪上，4℃孵育过夜或室温孵育2小时。

注：孵育过程中，如果磁珠发生聚团或呈片状属正常现象，不会影响实验结果。

2.磁分离。孵育完毕后，置于磁力架上分离10秒，去除上清。

3. 洗涤。加入500μL 的IP裂解液，并轻轻重悬抗DYKDDDDK磁珠。然后置于磁力架上分离10秒，去除上清。重复洗涤三次。

四、洗脱

根据标签蛋白的特点及后续实验要求，可以选择如下3种方法之一进行洗脱：

1.SDS-PAGE上样缓冲液洗脱法：本方法为变性法，加入适量1×SDS-PAGE上样缓冲液，然后，95-100℃持续煮5分钟，得到的蛋白样品适合SDS-PAGE电泳或WB检测。

2.DYKDDDDK多肽竞争洗脱法：本方法为非变性法，洗脱效率高，且洗脱后的蛋白保持原有的生物活性，便于后续分析检测。

3.酸性洗脱法：本方法为非变性法，比较快速且高效。洗脱后的蛋白保持原有的生物活性，便于后续分析检测。酸性洗脱法虽然高效，但仍可能低于竞争洗脱法或SDS-PAGE上样缓冲液洗脱法。

【注意事项】 

1.本产品需与磁性分离设备配套使用。

2.冷冻、干燥和离心等操作常常会引起磁珠团聚，不易于重悬和分散，并且可能影响本磁珠的活性。

3.在使用本产品前，请务必轻柔混匀并充分重悬磁珠呈均匀的悬浮状态。若用微量枪头吹打混匀，务必轻轻吹打，并建议提前剪掉尖头。

4.本产品仅供科研使用。