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2×UniTaq SYBR qPCR Master Mix(ROX-)

P1504
2×UniTaq SYBR qPCR Master Mix(ROX-)

  • 货号: P1504
  • 商品名称: 2×UniTaq SYBR qPCR Master Mix(ROX-)
  • 规格: 5ml/包
  • 价格: 1000
  • 产品参数
  • 货号: P1504
  • 商品名称: 2×UniTaq SYBR qPCR Master Mix(ROX-)
  • 规格: 5ml/包
  • 价格: 1000

UniTaq SYBR qPCR Master Mix(-ROX

【产品简介】

本产品是使用SYBR Green I 嵌合荧光法进行qPCR反应的专用预混液。核心组分Taq Polymerase是基于抗体法修饰的热启动聚合酶,具有特异性强、检测灵敏度高、扩增产量高等特点。配合特殊优化的buffer,可进行高特异性、高灵敏的qPCR扩增。本产品含有特殊的ROX,适配常用的qPCR仪器,无需在不同仪器上调整ROX的浓度。本产品是一款2×预混液,只需加入引物和模板即可进行扩增。


【适用范围】

本试剂用于DNA样本的扩增,可以扩增各物种来源的DNA,样本类型可以是基因组DNA、cDNA、质粒DNA等


优点实例

1、良好的扩增均一性:

   实例一:

 

以HELA细胞cDNA为模板(10ng/20ul体系,以RNA量为准)扩增内参基因ACTIN-B,默认程序,48孔重复实验,最大孔间差<0.4CT(0.39)。

   


实例二:

 

以HELA细胞cDNA为模板,进行10倍梯度稀释,四个浓度梯度,用ACTIN-B基因进行扩增,默认测序,扩增结果具有良好的一致性。




2、更广的可定量扩增区域

 

以N-蛋白质粒为扩增模板,梯度稀释(1×108~10拷贝数)后进行绝对定量扩增测试,每孔上1ul模板(20ul体系/孔),默认程序下,均能有效特异的扩增且具有良好的定量精准度和曲线线性。

 



3、高分辨力:

 

HELA细胞cDNA为模板,进行2倍梯度稀释,10个浓度梯度,用ACTIN-B基因进行扩增,默认程序扩增,结果可以看到本产品能准确的分辨2倍稀释的样品且扩增高度特异。



 

4、良好的检出率:

 

HELA细胞cDNA为模板10ng/20ul体系,以RNA量为准)对12个随机基因进行扩增测试,结果显示均能特异性扩增。

 


【货    号】 P1503-S

【保存条件】-20℃避光保存1年,解冻后可于2~8℃避光存放6个月;低温运输。


【使用说明】

1、反应液配制(以20ul体系为例)

试剂名称

使用量

终浓度

2×UniTaq SYBR qPCR Master Mix

Forward Primer(10uM)

Reverse Primer(10uM)

DNA sample

RNase free water

10 ul

0.6 ul

0.6 ul

X ul

Up to 20ul

 

0.3 uM

0.3 uM

 

注:a、引物的添加量以各引物的最终浓度为0.2~0.6uM,当扩增效率低时,可通过优化添加量来提高反应性能,

       但要注意添加量过多时可能会产生非特异 性扩增。    

    b、如模板为未稀释的cDNA原液,使用体积不应超过反应总体积的1/10,过高的模板量会抑制反应的正常进行。

 

2、反应条件

qPCR的基础循环为例,具体循环条件可根据需要进行调整。

a、该预变性条件适合大多数扩增反应,如模板结构复杂,可将预变性时间延长至5min以获得更好的效果。

b、延伸的温度请在55~72℃的范围内进行优化,可改善检测的灵敏度。c、融解程序使用默认程序。

【注意事项】

1、使用前应完全解冻,混匀后再使用。

2、本品应尽量避免反复冻融,以免造成酶活性的下降和dNTPs的降解。如每次用量较少,推荐小份分装使用。

3、由于本产品检测灵敏度极高,易被空气中的气溶胶污染,因此配制混合体系时请于超净工作台中操作,配制过程中请使用灭菌枪头、反应管,条件允许时使用专用移液器和带滤芯的吸头



【FAQ】

◇扩增曲线异常

1、扩增曲线非正常抖动:信号强度弱,通过系统矫正后产生。提高模板上样量重复实验或更换高质量模板。

2、扩增曲线断裂或下滑:模板浓度过高产生了反应抑制;基线扣除错误。降低模板上样量或将模板稀释后再上样;手动调整基线终点至CT值-3,重新分析

3、偶发个别曲线骤降:反应孔内有气泡残余。加样时要小心,进行反应前要仔细检查反应孔内是否有气泡残余,若有,可轻弹后离心即可消除。


◇扩增结束后无扩增曲线出现

1、确认程序中是否设置了信号采集步骤:两步法中,信号采集设置在退火延伸阶段;三步法中,信号采集设置在72℃延伸阶段。

2、确认引物是否降解:长时间未用的引物应先通过PAGE电泳检测完整性,以排除由于引物降解导致无扩张现象。

3、模板浓度太低:减少稀释度重新实验,一般从高浓度开始做起。

4、模板降解:重新制备模板,重复实验。


◇CT值较大

1、扩增效率极低:优化实验条件,尝试三步法扩增程序,或重新设计合成高特异引物。

2、模板浓度过低:减少稀释度或增加上样量。

3、模板降解:重新制备模板,重复实验。

4、反应体系中存在抑制剂:重新制备模板或使用qPCR专用的抽提、反转试剂盒


◇阴性对照出现明显扩增

1、反应体系存在污染:更换新的Master Mix、水、引物重新实验。配制反应时应避免气溶胶污染。

2、引物二聚体出现:根据融解曲线进行分析,必要时重新设计引物。


◇融解曲线出现多峰

1、引物设计不优:根据设计原则重新设计合成引物。

2、引物浓度过高:适当减低引物浓度

3、模板存在基因组污染:重新制备模板或使用qPCR专用反转录试剂。


◇绝对定量标准曲线拟合程度差

1、加样误差:提高模板稀释倍数,提高加样体积减少误差。

2、标准品降解:重新制备标准品,重复实验。

3、模板浓度过高:提高模板稀释度重新实验


◇实验重复性差

1、加样误差大:使用性能优良的移液器;提高模板稀释度,以大体积加样。

2、模板浓度过低:模板浓度低,重复性越差,减少模板稀释度或提高上样体积。

3、仪器失准:定期校准仪器。



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