液体活检-循环肿瘤细胞,广州天涯生物技术

循环肿瘤细胞（CTCs）是指由肿瘤原位脱落释放到外周血中的肿瘤细胞，他们被认为是肿瘤转移过程的关键环节[1.2]。CTCs作为非侵入性诊断工具，在早期肿瘤检测，预后判断，疗效评价以及个体治疗中具有诊断研究意义[3,4]，因此CTCs捕获富集技术对于阐明CTCs的生物学本质和亚群分型研究至关重要。

▍研究循环肿瘤细胞的意义

① 作为预后评估的生物标志物

自2004年后的Cellsearch检测7.5ml血液中的CTC个数来判定403例乳腺癌症的生存预期CTC/7.5ml>5具有较高的死亡风险，前列腺和结直肠癌也得到相似的验证[5,6]。FDA批准了CTC可作为mBC（转移性乳腺癌）、mPC（转移性前列腺癌）、mCRC（转移性结直肠癌）患者的预后生物标志物，美国癌症联合委员会AJCC进一步肯定了CTC在预后评估的意义[7]后面也有一系列科研方法成功分离CTCs并进行计数研究[8]。

② 作为实体瘤早期发现的标志物辅助初步诊断

在早期肿瘤的发展过程中就有CTC脱落进入血管，有研究发现并不需要经历转变步骤甚至在肿瘤没有形成之前，就能在血液中检测到CTC[9]。有研究者将CTC计数用于区分良性和恶性的肺癌患者，并通过此项来降低由于CT带来的胸部误读率[10,11]

③ 作为预测性标志物来指导治疗

2013年美国临床肿瘤学会会议上展示了SWOGS0500 临床实验，该实验的内在假设是基于CTC的水平来定制治疗方案，若对一线治疗耐药则进行更换治疗方案[12]。有很多研究表明利用分离CTC检测乳腺癌HER2可以评价抗HER2治疗的疗效,检测NSCLC患者中CTCs的PDL1来进行治疗[13,14]

应用平台-

稀有细胞分析前处理平台

-新一代微流控芯片技术

分离原理：流体力学原理对细胞进行无损分离与富集

● 技术原理

技术原理：确定性侧向位移，依据细胞核质比、刚性、尺寸及形变能力等物理特性，即在微柱阵列中超过临界半径的特定物质碰撞后发生侧向位移一汇聚，如CTC，CTM（上图红线），非目标物质按照其原流向过阵列，如红细胞（上图绿线）

▍与常见免疫分离CTCs技术比较

① 不依赖于肿瘤细胞标记物，如免疫磁珠选择性CD45-EpCAM+,如CellSearch或者选择性CD45+ 如RARE：系统复杂，正常细胞的假阳性，抗体结合过饱和的漏检。

② 兼容下游各种分析手段，如根据细胞大小和EpCAM+芯片捕获，如CTC-Chip:数据应用很大的局限性

实验服务流程

▍送样要求

① 样本类型：外周血

② 采血量：1-5ml

③ 抗凝类型：EDTA紫色凝血管

④ 送检时间：离体6h以内

▍富集过程

① 500g离心，去除血浆，收集红细胞沉淀

② PBS重悬红细胞沉淀后，上机（睿思生命芯片平台）

③ 收集后，进行实验验证及各项服务

▍实验验证

① 细胞形态学：HE染色 Diff快速染色

② 细胞免疫实验：免疫荧光免疫组化 imFISH

③ 分子实验：CTC分子分型，RT-PCR NGS，DNA甲基化

④ 细胞培养

⑤ 蛋白组学

⑥ 功能性验证实验，靶标基因检测，突变等，可按照客户要求定制

▍检测

HE染色

免疫荧光检测

细胞培养

▍下游实验

① CTC分子分型，功能分型，基因变异，转录组，蛋白组分析

② 动物模型

③ 药筛实验

④ 定制实验

▍案例

病情监测

受检者欧阳年龄 38岁

既往病史

浸润性导管癌Ⅱ级；做乳腺肿物切除术+做乳腺癌改良根治术+左应用假体乳房再造术

术后每隔21天进行一次化疗

报告结果总览

检测时间点	CAC细胞个数（个/ml）	备注
1	上皮型 102.67 CSC 213.33	术后未化疗
2	上皮型 0.4 CSC 31.2	化疗后21天
3	上皮型 0.38 CSC 6.15	化疗后21天
4	上皮型 0 CSC 5.28	化疗后21天

受检者无意中发现左乳房上有一硬块，经病理检测未浸润性导管癌II级。医院建议其手术切除，并进行一个疗程化疗。该检测，针对该受检者进行跟踪诊断，分别对其进行上皮型、间质型以及以CD45-CD24-/lowCD44+CD45-为乳腺癌转移可能性进行为期5次的分析检测。其时间节点分别为术后一个月化疗前，每次化疗前进行抽血检测。受检者上皮型以及CSC型CTC在术后出现最高值，并未检测到间质型CTC。随着化疗的进行，上皮型和CSC型CTC均有所下降，上皮型CTC在第三次化疗后没有检测到。说明，此次化疗对受检者起到正面的疗效。

参考文献

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液体活检-循环肿瘤细胞

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